Cómo realizar pruebas sobre el crecimiento bacteriano con Sodio

September 6

Un cultivo de bacterias en soluciones hechas a partir de una amplia variedad de sodio (NaCl) concentraciones le dará una buena idea de la concentración óptima de los organismos necesita para el crecimiento. concentración de soluto interna de las células determinar qué solución es isotónica. tasa de crecimiento máxima se produce en la solución más isotónica, con la disminución de la tasa de crecimiento tanto en soluciones hipertónicas y hipotónicas.

Instrucciones

Concentración de NaCl

1 Escoja una variedad de concentraciones de NaCl para comenzar: sin sal, 0,5 molaridad (M), 1,0 M, 1,5 M, 2,0 M. Hacer un conjunto separado de tubos de dilución en cada concentración de NaCl. También necesitará un conjunto separado de placas de Petri con agar nutriente en cada concentración de NaCl.

2 Configurar los tubos de dilución en 0,5 M de concentración de NaCl. Prescindir de 9 ml de solución 0,5 M de NaCl en cada uno de 5 tubos de dilución. Etiquetar los tubos 10 ^ 1, 10 ^ 2, todo el camino hasta 10 ^ 5. Transferir 1 ml de la fase de registro de células de E. coli al tubo 10 ^ 1. Agite la mezcla. Transferir 1 ml de la 10 ^ 1 al tubo 10 ^ 2. Agite la mezcla. Continuar este procedimiento a cabo en el tubo de 10 ^ 5.

Repita este procedimiento para cada concentración de NaCl.

3 Placa de cada conjunto de tubos en las placas de agar nutriente a la concentración correcta. Dispensar 1 ml del tubo 10 ^ 1, 0,5 M NaCl en una placa de petri agar nutriente con la etiqueta "10 ^ 1, 0,5 M NaCl). Desechar el tubo. Dispense 1 ml del tubo 10 ^ 2, 0,5 M NaCl en un nutriente placa de agar de Petri etiquetada "10 ^ 2, 0,5 M NaCl). Utilice un esparcidor estéril para difundir la muestra de manera uniforme sobre los medios de comunicación solidificada. Continuar este procedimiento a 10 ^ 5.

Repetir en todas las concentraciones de NaCl.

incubar las placas

4 Tome las placas y convertirlos al revés (por lo que los medios de comunicación en la placa esté hacia arriba). De acuerdo con la Organización Mundial de la Salud (OMS), E. coli tiene una temperatura óptima de crecimiento de 37 grados centígrados. Incubar durante 24 a 48 horas hasta que la observación del crecimiento de la colonia.

5 La incubadora debe seguir siendo un 37 grados centígrados estable durante todo el experimento, ya que la temperatura varía podría afectar los resultados.

6 Retire las placas de la incubadora después de 48 horas.

La enumeración de colonias

7 Después de la incubación de las placas han terminado, organizar todas las placas de la concentración de NaCl. Encuentra la dilución (10 ^ 10 ^ 1 a 5) que contiene de 25 a 250 colonias por placa. Este es el recuento óptimo para la enumeración de bacterias en una placa.

8 Contar las colonias y compara entre las concentraciones de NaCl. El conjunto de placas que tiene el mayor número de colonias es más cercana a la concentración óptima de NaCl.

9 Si desea obtener una estimación más cerca de la concentración óptima de NaCl para el crecimiento, repetir el experimento con concentraciones de NaCl alrededor de la persona que encontró que el mejor crecimiento (por ejemplo, si el crecimiento más alto se encontró en 0,5 M, elija concentraciones de 0,3 M, 0,4 M , 0,5 M, 0,6 M y 0,7 M para repetir el experimento).

Consejos y advertencias

  • E. coli puede ser potencialmente peligroso si no se maneja adecuadamente. No experimentar con la O157: H7 variedad.

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